在透射電鏡中,用電子束代替平行入射光束,用薄膜狀的樣品代替周期性結構物體,就可重復以上衍射成像過程,(2)對于透射電鏡,改變中間鏡的電流,使中間鏡的物平面從一次像平面移向物鏡的后焦面,可得到衍射譜,固定的目的主要是終止組織細胞的生化過程,同時把它們的超微結構改變控制在zui小范圍內,并保護這些結構在后續的脫水、包埋等過程中不被破壞;常用雙固定法,用一定濃度的戊二醛對樣品預固定,漂洗后使用鋨酸對樣品進行后固定。
2切片厚度50~100nm為宜:太薄反差低;太厚反差好,但結構重疊,電子束不能穿透;,3切片應耐電子束的強烈照射,不變形不升華;,4切片能夠適當被染色,保證一定的反差;,5切片均勻,無影響拍照的皺褶、刀痕或染色污染,其中,DigitalMicrograph不僅能夠自動識別Gatan公司電鏡拍攝的dm3、dm4、Tif文件中的標尺、放大倍數、儀器型號等信息,還能夠對圖片中進行上偽色突出對比度、選區傅里葉變換、劃線取向灰度分析等。
染色方法有單染,包括鉛鹽單染和鈾鹽單染;雙染色,醋酸鈾染色和檸檬酸鉛染色,雙染色呈現結果更全面,我們一般采用的雙染法進行染色,常用染色劑:醋酸鈾,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、細胞核、結締組織,檸檬酸鉛,主要染膜結構、脂類、糖原等,易與CO2反應成沉淀,染色中應采取措施避免,電鏡照片主要解析粒徑分布、單晶/多晶、晶面結構、元素和原子分散,其本質是信號的空間分布,基本機理與比例尺地圖是一致的。