2切片厚度50~100nm為宜:太薄反差低;太厚反差好,但結構重疊,電子束不能穿透;,3切片應耐電子束的強烈照射,不變形不升華;,4切片能夠適當被染色,保證一定的反差;,5切片均勻,無影響拍照的皺褶、刀痕或染色污染,其中,DigitalMicrograph不僅能夠自動識別Gatan公司電鏡拍攝的dm3、dm4、Tif文件中的標尺、放大倍數、儀器型號等信息,還能夠對圖片中進行上偽色突出對比度、選區傅里葉變換、劃線取向灰度分析等。
沿管壁緩慢加入戊二醛預固定液,不要沖擊細胞團,靜置30min后可送樣,請在4~10℃保存或運輸,嚴禁結冰(太靠近冰箱后壁或冰袋運輸都可能使樣品結冰,冬季寧可常溫送樣),細胞高速離心收集方法,本方法過去被大多數單位采用,沒有“GT2”時的應急取材也可使用,各儀器公司的拍攝控制軟件是比較專業化的處理工具,能夠在處理基本粒徑分析、晶面間距等測量外,還能夠進行傅里葉變換、降噪處理等,得到更加深入的數據結果。
鋨酸是強氧化劑,固定脂類、膜結構,有電子染色作用,3脫水,用適當的有機溶劑取代組織和細胞中的游離態水分,使之能與包埋劑混合,脫水要徹底,更換液體動作要迅速,脫水時間不宜過長,且固定后的樣品要充分漂洗,4滲透、包埋與聚合,4,1滲透,2包埋與聚合,加溫在60℃聚合形成固體基質,牢固地支撐整個細胞結構或組織,制成適于機械切割的固體樹脂包埋塊,利于切片,常用玻璃刀、鉆石刀進行超薄切片,刀上要裝水槽,并注入槽液。